大鼠elisa試劑盒操作步驟詳解
瀏覽次數:643發布日期:2022-01-19
大鼠elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中大鼠TNF-α的濃度。大鼠TNF-α捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的大鼠TNF-α會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗大鼠TNF-α抗體后,抗大鼠TNF-α抗體與大鼠TNF-α接合,形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。
生物素與親合素特異性結合,親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來;其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。加入顯色劑,若樣本中存在TNF-α將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,大鼠TNF-α濃度與0Dm值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中0D值,即可算出標本中TNF-α濃度。
大鼠elisa試劑盒操作步驟:
1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數,取出所需板條放置在框架內,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封,保存于4℃。
2.建議設置本底較正孔,即空白孔,設置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。
3.分別將標本或不同濃度標準品(100u1/孔)加入相應孔中,用封板膠紙封住反應孔,室溫孵育120分鐘。對于血清或血漿標本,請加入50u1樣本分析緩沖液后加50u1標本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
4.洗板5次,且置厚吸水紙上拍干。
5.加入生物素化抗體工作液(100u1/孔)。用封板膠紙封住反應孔,室溫孵育60分鐘。
6.洗板5次,且置厚吸水紙上拍干。
7.加入酶結合物工作液(100u1/孔)。用封板膠紙封住反應孔,避光室溫孵育20分鐘。
8.洗板5次,且置厚吸水紙上拍干。
9.加入顯色劑TMB100u1/孔,避光室溫孵育20分鐘。
10.加入終止液50u1/孔,混勻后即刻測量0D450值。