植物elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被抗體的微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。
 

　　植物elisa試劑盒操作注意事項(xiàng)：
 

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
 

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
 

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
 

　　4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
 

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 

　　6.底物請(qǐng)避光保存。
 

　　7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
 

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
 

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
 

　　植物elisa試劑盒結(jié)果判定：
 

　　試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
 

　　臨界值(CUT OFF)計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
 

　　陰性判定：樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為甘薯病毒(SPV)陰性
 

　　陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為甘薯病毒(SPV)陽(yáng)性