產(chǎn)品名稱 | 腺病毒B型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Adenovirus(AV) |
貨號 | CP933865 |
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法:
腺病毒B型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:
山崳酰氧基聚氧甘油酯標準品小鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸酸(NADPH)ELISA Kit,48T/96T
雙-基氧苯酚氧苯基三嗪標準品大鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸酸(NADPH)ELISA Kit,48T/96T
雙-基氧苯酚氧苯基三嗪相關物質混合物標準品
腺病毒B型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒人胎盤生長因子(PLGF)ELISA Kit,48T/96T
鹽酸貝那普利標準品小鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA Kit,48T/96T
貝那普利相關物質A標準品大鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA Kit,48T/96T
貝那普利相關雜質B標準品人P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA Kit,48T/96T
貝那普利相關物質C標準品小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA Kit,48T/96T
貝那普利相關物質D標準品大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA Kit,48T/96T
苯那普利相關化合物E標準品人正常T細胞表達和分泌因子(RANTES)ELISA Kit,48T/96T
貝那普利相關物質F標準品小鼠正常T細胞表達和分泌因子(RANTES)ELISA Kit,48T/96T
苯那普利相關化合物G標準品大鼠正常T細胞表達和分泌因子(RANTES)ELISA Kit,48T/96T
芐氟噻嗪標準品雞L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA Kit,48T/96T
鹽酸奧布卡因標準品人L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA Kit,48T/96T
苯醛標準品小鼠L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA Kit,48T/96T
苯扎銨標準品大鼠L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA Kit,48T/96T GRB10 生長因子受體結合蛋白10抗體毛蕊異黃酮苷
GRASP65 高爾基體外周膜蛋白p65抗體京尼平
GRAP2 生長因子受體結合蛋白2相關接頭蛋白2抗體黃柏堿
Granzyme K 顆粒酶K抗體朝藿定A1
Granzyme D/B/E/N/G/F/H 顆粒酶D/B/E/N/G/F/H抗體楊梅苷
GRAMD3/NS3TP2 型肝炎病-NS3反轉錄激活蛋白2抗體人參皂苷Ro
GRAMD2 GRAM結構域蛋白2抗體灰氈毛忍冬皂苷
GPX4 谷胱甘肽過氧化酶4抗體銀杏內酯J
GPX3 谷胱甘肽過氧化酶3特女貞苷
GPX1 谷胱甘肽過氧化酶1京尼平苷酸
GPVI/Glycoprotein VI 糖蛋白VI/六糖蛋白抗體川續(xù)斷皂苷
GPV/Goose parvovirus 鵝細小病GPV抗體表告依春
GPSM2 G蛋白信號調節(jié)蛋白2抗體大車前苷
GPSM1 G蛋白信號調節(jié)蛋白1抗體8-O-酰山梔苷酯
GPS1/CSN1 G蛋白通路抑制蛋白1抗體水晶蘭苷
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
©2024 上海莼試生物技術有限公司 版權所有 備案號:滬ICP備17029297號-3 技術支持:化工儀器網(wǎng) GoogleSitemap 總訪問量:105241 管理登陸