注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 圓弧青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Penicillium cyclopium |
貨號 | CP934579 |
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法:
圓弧青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產品:
2,4,6-三(2'-吡啶基)三嗪小鼠基質金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試盒
2,4-雙(異胺)-6--1,3,5-三嗪小鼠基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試盒
2,6-二基-1,4-二嗪小鼠基質金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試盒
2-氨基-4--6-異氨基-1,3,5-三嗪小鼠基質金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試盒
4,6-雙(異胺基)-2-硫基-1,3,5-三嗪小鼠基質金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP2/Gel A)抗體ELISA試盒
5-基胞嗪小鼠基質金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA試盒
N-(2-羥基)哌嗶嗪小鼠基質金屬蛋白酶10(MMP-10)ELISA試盒
N2,N4,N6-三-2,4,6-三胺-1,3,5-三嗪小鼠基質金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試盒
噠嗪小鼠基質γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)ELISA試盒
二苯并噻嗪小鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)ELISA試盒
反式-2,5-二基小鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA試盒
吩嗪小鼠肌酸激酶(CK)ELISA試盒
桂益嗪小鼠肌球蛋白重鏈(MHC)ELISA試盒
圓弧青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒化-3,7-二氨基吩噻嗪小鼠肌球蛋白(MYS)ELISA試盒
肉桂苯小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試盒醋酸月桂酸酯/十二醇酸酯/月桂醇酸酯(C12:0)112-66-3醋酸月桂酸酯/十二醇酸酯/月桂醇酸酯(C12:0),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm
醋酸油醇酯/十八碳烯醇酸酯(順-9)/油醇酸酯(C18:1)醋酸油醇酯/十八碳烯醇酸酯(順-9)/油醇酸酯(C18:1),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm
醋酸硬脂醇酯/ 十八醇酸酯/硬脂醇酸酯(C18:0)822-23-1醋酸硬脂醇酯/ 十八醇酸酯/硬脂醇酸酯(C18:0),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm
醋酸巖芹醇酯/十八碳烯醇酸酯(順-6)/巖芹醇酸酯(C18:1)醋酸巖芹醇酯/十八碳烯醇酸酯(順-6)/巖芹醇酸酯(C18:1),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm
醋酸亞油醇酯/十八碳二烯醇酸酯(順-9,12)/亞油醇酸酯(C18:2)醋酸亞油醇酯/十八碳二烯醇酸酯(順-9,12)/亞油醇酸酯(C18:2),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm
醋酸辛酯/酸辛酯(C8:0)112-14-1醋酸辛酯/酸辛酯(C8:0),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm
醋酸纖維素9004-35-7200mg,供IR鑒別用
醋酸纖維素9004-35-7200mg,供IR鑒別用
醋酸戊酯/酸戊酯(C5:0)123-86-4醋酸戊酯/酸戊酯(C5:0),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm
醋酸十五碳酸酯/十五醇酸酯(C15:0)629-58-3醋酸十五碳酸酯/十五醇酸酯(C15:0),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm
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