注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 兔粘液瘤病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Rabbit Myxomatosis Virus(RMV) |
貨號 | CP934647 |
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法:
兔粘液瘤病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產品:
ST2 白細胞介素1受體相關蛋白抗體人蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,2(PSMB2)ELISA試盒
ST14/MTSP1 絲氨酸蛋白酶14/膜型絲氨酸蛋白酶1抗體人蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)ELISA試盒
SSX8 滑膜肉瘤X斷點蛋白8抗體人蛋白酶激活復合體亞基2(PSME2)ELISA試盒
SSX5 滑膜肉瘤X斷點蛋白5抗體人蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質抗體(PR3-ANCA)ELISA試盒
SSTR5 生長抑素受體5抗體人蛋白酶3抗體(PR3Ab)ELISA試盒
SSTR4 生長抑素受體4抗體人蛋白酶3(PR3)ELISA試盒
SSTR3 生長抑素受體3抗體人蛋白酸酶2(2A),催化亞基,β亞型(PPP2CB)ELISA試盒
SSTR2 生長抑素受體2抗體人蛋白酸酶1調控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)ELISA試盒
SSTR1 生長抑素受體1抗體人蛋白酪氨酸酸酶自身抗體ELISA試盒
SSEA3 階段特異性胚胎表面抗原-3抗體人蛋白酪氨酸酸酶1B(PTP1B)ELISA試盒
SSDD/Steroid sulfatase 類固醇硫酸酯酶抗體人蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試盒
兔粘液瘤病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒SSBP2 抑癌基因SSDP2抗體人蛋白精氨酸脫亞氨酶4(PADI4)ELISA試盒
SSB/La 干燥癥SSB/La抗體人蛋白精氨酸基轉移酶1(PRMT1)ELISA試盒
SSA/52KDa Ro 核糖核蛋白抗原抗體人蛋白激酶C(PKC)ELISA試盒
SRXN1 硫氧還蛋白1抗體人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)ELISA試盒2,3,5-三聯苯[55720-44-0]5mg
2,3,5,6-四聯苯(PCB 65) 標準品1ml
2,3,5,6-四聯苯[33284-54-7]25mg
2',3,4-三聯苯醚2',3,4-TRIBDE1.2ml
2,3',4-三聯苯醚2,3',4-TRIBDE1.2ml
2,3,4-三聯苯(PCB21 ) 標準品1ml
2,3,4´-三聯苯(PCB 22) 標準品1ml
2,3,4´-三聯苯[38444-85-8]5mg
2,3,4´,6-四聯苯(PCB 64) 標準品1ml
2,3,4´,6-四聯苯[52663-58-8]5mg
©2024 上海莼試生物技術有限公司 版權所有 備案號:滬ICP備17029297號-3 技術支持:化工儀器網 GoogleSitemap 總訪問量:105514 管理登陸