培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
產(chǎn)品描述:公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人呼吸道上皮細(xì)胞 |
英文名稱 | HumanAirway:NormalAirwayEpithelialCells |
貨號 | CS-X3263 |
細(xì)胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,很難說是細(xì)胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式,快遞時(shí)間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進(jìn)口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
18.75pg/ml大鼠孕激素/孕(PROG)ELISA試盒(Pyr5,N-Me-Phe8,Sar9)- Substance P (5-11)
4.688pg/ml小鼠孕受體(PROGR)ELISA試盒 Substance P (6-11)
37.5pg/ml大鼠孕受體(PROGR)ELISA試盒 (Pyr6)-Substance P (6-11)
18.75pg/ml大鼠孕受體(PGR)ELISA試盒 (Pyr6,Pro9)-Substance P (6-11), Septide
0.180ng/ml大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試盒Succinyl-(Asp6,N-Me-Phe8)-Substance P (6-11), Senktide
0.188ng/ml大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試盒Substance P (7-11)
9.375ng/ml大鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA試盒δ -Aminovaleryl-(Pro9,N-Me-Leu10)-Substance P (7-11)
0.094ng/ml大鼠妊娠相關(guān)漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試盒Substance P (9-11)
0.469ng/ml大鼠小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA試盒 (D-Arg1,D-Phe5,D-Trp7•9,Leu11)-Substance P
0.188ng/ml大鼠小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試盒Peptide WE-14
人呼吸道上皮細(xì)胞去泛素化酶3(DUB3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)地爾卓
黑素曲菌素(MREG)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)去酰地爾卓-d3
天冬酰胺氨肽酶(ASPEP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)O-去基地爾卓
脫氧鳥苷激酶(DGUOK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)去酰地爾卓
二葉還原酶(DHFR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)去[5-(2-二氨基)基]地爾卓
D-天冬氨氧化酶(DDO)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)N,N-去二基地爾卓鹽鹽
二羰基/L-木糖還原酶(DCXR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)O-去酰-N-去基地爾卓
dCMP脫氨酶(DCTD)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)N-去基地爾卓鹽鹽
Dachsous 2蛋白(DCHS2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)地美司鈉-d8
Dachsous 1蛋白(DCHS1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)多拉司瓊
D2-羥基戊二二酯脫酶(D2HGDH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)多塞平N-氧化物
糖磺基轉(zhuǎn)移酶14(CHST14)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)多塞平鹽鹽-d3
Cystin 1蛋白(CYS1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)4-羥基度洛西汀-d6
Cylicin 2蛋白(CYLC2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)度洛西汀
Cylicin 1蛋白(CYLC1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)4-羥基度洛西汀
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