培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
產(chǎn)品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標(biāo)準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務(wù)標(biāo)準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠肺大靜脈平滑肌細胞 |
英文名稱 | MouseLung:NormalVeinSmoothMuscleCells |
貨號 | CS-X3345 |
細胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,很難說是細胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
0.188ng/ml豬C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試盒pSELECT-mASC-GFP
0.188ng/ml豬皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試盒pSELECT-zeo-mcs
0.188ng/ml豬皮質(zhì)/腎上腺(CORT)ELISA試盒pSELECT-mHMGB1-Lucia
0.469ng/ml豬補體蛋白3(C3)ELISA試盒pSELECT-zeo-mSEAP-CpG-free
0.469ng/ml豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試盒pSELECT-NGFP-zeo
0.188ng/ml豬Ⅱ型膠原(Col Ⅱ) ELISA試盒 pSELECT-NHA-zeo
0.094ng/ml豬膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試盒 pSELECT-NHis-zeo
0.094ng/ml豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試盒pSELECT-NLucia-zeo
0.094ng/ml豬Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試盒pSELECT-zeo-SEAP
0.375ng/ml豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA試盒pSELECT-zeo-GFPBsr
小鼠肺大靜脈平滑肌細胞肝內(nèi)膽管上皮細胞人狀腺成纖維細胞,HTF細胞
肝實質(zhì)細胞人狀腺上皮細胞
肝動脈內(nèi)皮細胞人結(jié)腸成纖維細胞
肝動脈平滑肌細胞人結(jié)腸平滑肌細胞
肝星形細胞人結(jié)腸粘膜上皮細胞
肝竇內(nèi)皮細胞人口腔黏膜上皮細胞
胃粘膜上皮細胞人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞
腎小球內(nèi)皮細胞人類直腸平滑肌細胞,HRSMCTR細胞
腎近曲管狀上皮細胞人卵巢間質(zhì)細胞
腎皮層上皮細胞人毛發(fā)外根鞘細胞,HHRSCL細胞
腎上皮細胞人毛囊角質(zhì)細胞,HHFK細胞
輸尿管上皮細胞人內(nèi)皮祖細胞
腎實質(zhì)細胞人內(nèi)皮祖細胞-誘導(dǎo)
腎系膜細胞人臍動脈內(nèi)皮細胞,HUAECP細胞
膀胱上皮細胞人臍動脈平滑肌細胞,HUASMCP細胞
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